KCTC Media No. 1428 : Peptone-Yeast extract Mucin medium

조성	용량	단위
Peptone	2.0	g/L
Yeast extract	0.5	g/L
hog gastric mucin (Type 3; Sigma)	2.5	g/L
Mineral solution 1	50	ml
조성 용량 단위 K2HPO4 6 g/L
Mineral solution 2	50	ml
조성 용량 단위 NaCl 12 g/L KH2PO4 6 g/L CaCl2·2H2O 1.2 g/L MgSO4·7H2O 1.2 g/L (NH4)2SO4 12 g/L
Pfenning’s solution	10.0	ml
조성 용량 단위 EDTA 0.5 g/L ZnSO4·7H2O 0.1 g/L MnCl2·4H2O 0.03 g/L H3BO3 0.03 g/L CoCl2·6H2O 0.2 g/L CuCl2·2H2O 0.01 g/L FeCl2·4H2O 1.5 g/L NiCl2-6H2O 0.02 g/L Na2MoO4·2H2O 0.03 g/L Na2SeO3 0.01 g/L add components sequentially to 1L distilled water and allow to dissolve completely before adding the next component
VFA solution	10.0	ml
조성 용량 단위 NaOH (0.2N) 700 ml Acetic acid 17 ml Propionic acid 6 ml Butyric acid 4 ml Iso-Butyric acid 1.0 ml 2-metylbutyric acid 1.0 ml valeric acid 1.0 ml Iso-valeric acid 1.0 ml adjust pH 7.5 and volume to 1L with distilled water
Hemin solution(100ml)	1.0	ml
조성 용량 단위 NaOH(1N) 1.0 ml Hemin 50 mg adjust volume to 100ml with distilled water
Resazurin (0.1%, w/v)	1.0	ml
Cysteine sulfide solution(200ml)	20.0	ml
조성 용량 단위 NaOH 1.25 g Cysteine-HCl 5.0 g Na2S·9H2O 5.0 g dissolve NaOH in 200ml distilled water, then boil, cool to room temperature under N2 gas, and add Cysteine-HCl and Na2S·9H2O
NaHCO3	4	g/L

** ph : 6.8

** memo : cf) 10% Clarified rumen fluid can be used instead of Pfenning’s solution, VFA solution, and Hemin solution.

1. Mineral solution 1, 2, peptone, yeast extract, hog gastric mucin, Pfenning’s solution, VFA solution, resazurin, 증류수를 넣고 충분히 섞은 후 전자레인지에 한 번 끓여서 산소를 제거해줍니다.
2. 상온에서 식혀주면서 CO2가스로 배지를 충진시켜주고 어느 정도 식은 경우 Hemin solution, NaHCO3, Cysteine sulfide solution을 넣어줍니다.
3. pH를 6.8로 맞춰주고 혐기챔버로 옮긴 후 hungate tube 또는 balch tube 등 혐기용 tube에 분주하고 autoclave 합니다.
- 혐기챔버에 이용되는 가스는 N2와 CO2 balance H2 5% 혼합가스를 이용하며 4번 질소가스로 치환 후 2번 혼합가스로 치환하여 혐기 상태 조성합니다.

Cf) Pfenning solution, VFA solution, Hemin solution은 10% clarified rumen fluid (원심분리 후 상층액만 따서 autoclave 시킨 반추위액)로 대체 가능합니다.

** 추가조치 사항 : -