** ph : 6.8

** memo : cf) 10% Clarified rumen fluid can be used instead of Pfenning’s solution, VFA solution, and Hemin solution.

1. Mineral solution 1, 2, peptone, yeast extract, hog gastric mucin, Pfenning’s solution, VFA solution, resazurin, 증류수를 넣고 충분히 섞은 후 전자레인지에 한 번 끓여서 산소를 제거해줍니다.
2. 상온에서 식혀주면서 CO2가스로 배지를 충진시켜주고 어느 정도 식은 경우 Hemin solution, NaHCO3, Cysteine sulfide solution을 넣어줍니다.
3. pH를 6.8로 맞춰주고 혐기챔버로 옮긴 후 hungate tube 또는 balch tube 등 혐기용 tube에 분주하고 autoclave 합니다.
- 혐기챔버에 이용되는 가스는 N2와 CO2 balance H2 5% 혼합가스를 이용하며 4번 질소가스로 치환 후 2번 혼합가스로 치환하여 혐기 상태 조성합니다.

Cf) Pfenning solution, VFA solution, Hemin solution은 10% clarified rumen fluid (원심분리 후 상층액만 따서 autoclave 시킨 반추위액)로 대체 가능합니다.

** additional actions :